病毒服务
细胞服务
基因服务
质粒
病毒
细胞
试剂
pSBbi-GB-mGRM7(Mouse)-RPBSA-EGFP-P2A-Puro
产品基本信息
| 产品名称 | pSBbi-GB-mGRM7(Mouse)-RPBSA-EGFP-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | mGRM7 | 物种 | 小鼠（Mouse) |
| 基因全称 | glutamate receptor, metabotropic 7 | 基因转录本 | NM_001346640.1 |
| 基因别称 | SMN2; Gpr1g; Gprc1g; mGluR7 | 表达蛋白 | NP_001333569.1 |
| 基因ID | 108073 | 转录本长度 | 2766bp |
| 拷贝数 | 高 | 筛选抗性 | Puro |
| 培养温度 | 37°C | 标签 | 无 |
| 原核抗性 | Amp+ | 荧光标记 | EGFP |
基因基本信息
小鼠Grm7基因定位于第6号染色体E3带，编码代谢型谷氨酸受体7（metabotropic glutamate receptor 7，mGlu7），属于C族G蛋白偶联受体中第III组代谢型谷氨酸受体家族。mGlu7主要定位于突触前活性区，通过偶联抑制性Gi/o蛋白，在谷氨酸能及GABA能神经元中发挥抑制神经递质释放的功能。该受体对谷氨酸具有极低的亲和力，被视为突触传递的“紧急制动”系统。
mGlu7蛋白属于C族G蛋白偶联受体，具有该家族典型的多结构域架构：
N端胞外结构域（Venus Flytrap Domain，VFD）： 约由500个氨基酸残基组成，形成双叶结构，负责结合谷氨酸配体。与其他mGlu受体相比，mGlu7的VFD对谷氨酸的亲和力极低，这是其作为“高阈值”受体的结构基础。富含半胱氨酸结构域（Cysteine-Rich Domain，CRD）： 连接VFD与7次跨膜结构域，参与受体激活的构象传递。7次跨膜结构域（7TM）： 典型的G蛋白偶联受体核心，负责与G蛋白偶联。
C端胞内结构域： mGlu7的C端相对较短，但包含多个调控位点。mGlu7a和mGlu7b异构体的差异正位于此区域，影响受体与支架蛋白（如PICK1）的相互作用。
睡美人（Sleeping Beauty，SB）转座子系统是1997年由Ivics等人从鱼类基因组中“复活”的一种Tc1/mariner样DNA转座子，是首个在脊椎动物中实现可控转座的人工转座系统。它由转座酶基因和两侧的反向重复序列（IR/DR）构成，通过“剪切-粘贴”机制将外源基因稳定整合至宿主基因组的TA二核苷酸位点。经过二十余年的定向进化改造，SB转座酶的活性较原始版本提升了超过100倍，在哺乳动物细胞中的基因转移效率接近病毒载体水平。SB转座子系统由两个核心组件构成：转座酶（transposase） 和转座子（transposon），通过 “剪切-粘贴”转座机制实现目的基因整合在基因组，对于≤10kb的基因表达都有很高的转座效率。
如果需要转座子稳转表达，需配套细胞稳转辅助试剂共转染目的细胞 ：货号：GC230100506
1.载体构建出库标准是什么？
载体出库默认小提质粒出库，质粒量≥4ug，含甘油菌和穿刺菌。如需要无内毒素质粒提取质粒，我司可提供无内毒素质粒提取业务。
无内毒素质粒中提（A) | 质粒量≥35ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提(B) | 无内毒素中提出库是质粒量≥100ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提 | 无内毒素大提出库是质粒量≥500ug，浓度大于≥500ng/uL |
2.甘油菌保存方法？
甘油菌50%（v/v）=新鲜菌种：灭菌甘油制备而成，收到甘油菌可直接放-80保存1年
3.甘油菌的复苏方法？
从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
4.穿刺菌的保存方法？
穿刺菌为无菌枪头取新鲜菌液，然后接种形成穿刺菌，穿刺接种的细菌在温箱中孵育过夜，并在第二天上午检查其是否生长，确保制备的穿刺菌表面上能看到细菌后冰袋邮寄发货。穿刺菌4°C保存时间不超过30d，收到穿刺菌后须在2周内，在含有相应抗生素（抗性信息可在质粒图谱中查看）琼脂平板上划线培养出单菌落，挑取单个克隆进行后续操作。
5.无内毒素质粒提取菌液制备建议方法？
制备起始培养物制备：从甘油菌或者穿刺菌制备的单克隆菌落平板中，挑取新鲜的单克隆菌落，接种于2–5 mL含有相应选择性抗生素的LB培养基中，在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养约8小时（使用的试管或锥形瓶体积应至少为培养物体积的4倍）。
将起始培养物按1/500至1/1000的比例稀释到选择性LB培养基中。在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养12–16小时（使用的锥形瓶或容器体积应至少为培养物体积的4倍）后用商品化的无内毒素质粒试剂盒提取，提取的无内毒素质粒用于后续细胞转染或病毒包装等。
注意：无内毒素提取的质粒建议通过酶切鉴定和测序鉴定与原质粒无差异后进行后续实验。避免质粒提取或菌液接种过程所引起的菌液交叉污染。
9.测序结果原始文件用什么打开？
测序结果原始文件可以用 Snapgene 软件，DNAman分析软件等进行分析。
暂无相关论文。