GC-pLenti-SFFV-TNN-Flag-P2A-Puro
订购信息
Order Information
产品说明书
Product Manual
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-pLenti-SFFV-TNN-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | TNN | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | tenascin N | 基因转录本 | NM_022093.2 |
| 基因别称 | TNW; TN-W | 表达蛋白 | NP_071376.1 |
| 基因ID | 63923 | 转录本长度 | 3897bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
Tenascin N（TNN，基因名TNN）是腱生蛋白（tenascin）细胞外基质糖蛋白家族的第四个成员，定位于人类染色体1q25.1，包含16个外显子，编码1299个氨基酸的分泌型基质蛋白，预测分子量约为142 kDa，TNN在正常成人组织中表达极为有限，主要见于骨生成部位、平滑肌、肾以及特定干细胞龛，但在多种实体肿瘤的活化基质中显著上调，尤其在低级别乳腺癌和结直肠癌中，使其成为肿瘤基质标记物和潜在治疗靶点的研究焦点。2022年的首次将TNN与常染色体隐性遗传非综合征型听神经病联系起来——TNN在螺旋神经节神经元中表达，其单倍剂量不足导致神经元密度下降和进行性听力损失，揭示了这一“肿瘤基质蛋白”在听觉系统中的意外关键功能。
TNN遵循腱生蛋白家族的经典模块化结构，从N端到C端依次为：
N端寡聚化结构域：包含一个预测具有七肽重复（heptad repeats）的区域（鸡Tenascin-W中位于氨基酸101-131），促进三聚体形成。在部分腱生蛋白中，两个三聚体通过N端半胱氨酸共价连接，形成六臂体（hexabrachion）。TNN被标注为同源六聚体。
EGF样重复（Epidermal Growth Factor-like repeats） ：鸡Tenascin-W包含1个部分和3个完整的EGF样重复。EGF样重复在腱生蛋白中数量相对保守。
FNIII结构域（Fibronectin type III domains） ：这是腱生蛋白家族中变化最大的区域。不同物种和不同腱生蛋白成员之间，FNIII结构域的数量差异巨大，人类TNN主转录本包含8-9个FNIII结构域。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
暂无相关论文。