pLenti-SFFV-TRA2A-Flag-P2A-Puro
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过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | pLenti-SFFV-TRA2A-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | TRA2A | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | transformer 2 alpha homolog | 基因转录本 | NM_013293.5 |
| 基因别称 | AWMS1, HSU53209 | 表达蛋白 | NP_037425.1 |
| 基因ID | 29896 | 转录本长度 | 846bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
Transformer 2 alpha homolog（TRA2A，基因名TRA2A）是SR样剪接因子家族中一个独特的成员，定位于人类染色体7p15.3，包含8个外显子（8 exons），编码282个氨基酸的核内RNA结合蛋白，分子量约32.7 kDa，主要定位于细胞核。TRA2A最初因与果蝇性别决定因子Transformer-2的序列同源性而被鉴定，其蛋白结构具有独特的模块化组织：中央的RNA识别基序（RRM）两侧翼以N端和C端的精氨酸/丝氨酸富集（RS）结构域，这一“RS-RRM-RS”架构使其有别于经典SR蛋白。TRA2A参与前体mRNA剪接的调控，特别是剪接位点的选择，并作为m6A（N6-甲基腺苷）调控因子网络的新成员，在RNA表观转录组学中占据独特位置。2026年的突破性研究确立TRA2A为HIV-1感染中巨噬细胞焦亡的关键负调控因子——TRA2A通过识别TXNIP mRNA上的m6A位点降低其稳定性，从而抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD介导的焦亡通路，在抗病毒防御与炎症控制之间维持平衡。TRA2A在HIV-1感染者巨噬细胞中显著下调，其 knockdown 促进病毒复制并激活焦亡，而过表达则逆转这些效应。TRA2A与TRA2B的功能冗余及反馈调控机制进一步揭示了SR样蛋白家族在剪接稳态维持中的协同逻辑。
TRA2A具有SR样剪接因子家族中独特的模块化结构：
N端RS1结构域：精氨酸/丝氨酸富集区域。在人类细胞中，RS1结构域在剪接和调控中发挥关键作用，其功能重要性高于RS2。
中央RRM结构域：RNA识别基序（RNA Recognition Motif），也称为RBD（RNA结合结构域）或RNP（核糖核蛋白结构域），长度约78-79个氨基酸。RRM负责序列特异性RNA结合，TRA2A通过其RRM与靶RNA中的特定序列元件（如外显子剪接增强子ESE）相互作用。
C端RS2结构域：精氨酸/丝氨酸富集区域。在果蝇中，RS2对性别决定基因的剪接模式控制至关重要，但在人类细胞中其功能重要性相对低于RS1。
这一“RS-RRM-RS”架构使TRA2A在SR样蛋白中具有独特性。TRA2A的RRM与经典SR蛋白（如SF2/ASF）的RRM具有显著序列差异，其底物识别特异性也因此不同。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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