pLenti-SFFV-SLC22A15-Flag-P2A-Puro
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过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | pLenti-SFFV-SLC22A15-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | SLC22A15 | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | solute carrier family 22 member 15 | 基因转录本 | NM_018420.3 |
| 基因别称 | FLIPT1, PRO34686 | 表达蛋白 | NP_060890.2 |
| 基因ID | 55356 | 转录本长度 | 1641bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
溶质载体家族22成员15（SLC22A15），又名FLIPT1，是SLC22A有机离子转运体家族中长期被归为“孤儿转运体”的成员之一。该基因定位于人类染色体1p13.1，编码547个氨基酸的多跨膜蛋白，由12个编码外显子，分子量约60.5 kDa。SLC22A15在体内广泛表达，以脑和骨髓表达最高，在肾脏、骨骼肌、心脏、肝脏、胎盘及白细胞中亦有较高水平。2020年，首个功能去孤儿化研究鉴定出SLC22A15偏好转运两性离子化合物，包括麦角硫因、肌酸、肌肽、加巴喷丁等，且部分底物的转运呈钠依赖性。2025年的突破性研究进一步确立SLC22A15为少突胶质细胞中受控肌酸释放的关键转运体——该转运体默认处于失活状态，仅在外源性底物（如GAA、GABA、MPP⁺）触发下通过一对一交换机制释放肌酸，从而防止产生肌酸的少突胶质细胞持续丢失肌酸。SLC22A15的氨基酸序列在物种间表现出惊人的高度保守性.
SLC22A15属于主要 facilitator 超家族（MFS） ，预测为多跨膜整合膜蛋白。基于Pfam结构域分析，SLC22A15包含：
Sugar_tr结构域（PF00083） ：位于约58-495位（小鼠同源蛋白），属于糖转运体样结构域。
MFS_1结构域（PF07690） ：位于约69-450位，是MFS超家族的标志性结构域。
跨膜螺旋：预测包含多个跨膜区段，典型MFS转运体具有12个跨膜螺旋。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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