plenti-SFFV-GBP2-Flag-P2A-Puro
订购信息
Order Information
产品说明书
Product Manual
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | plenti-SFFV-GBP2-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | GBP2 | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | guanylate binding protein 2 | 基因转录本 | NM_004120.5 |
| 基因别称 | GBP-2 | 表达蛋白 | NP_004111.2 |
| 基因ID | 2634 | 转录本长度 | 1557bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
GBP2（基因名GBP2，蛋白名GBP-2）定位于染色体1p22.2，是GBP家族中研究较为深入的核心成员之一，编码约67 kDa的胞质蛋白。GBP2最初被鉴定为干扰素应答基因，在抗病毒、抗细菌和抗寄生虫固有免疫中发挥核心作用。其抗病毒机制主要通过抑制宿主前蛋白转化酶furin，阻断病毒包膜糖蛋白的成熟加工；同时参与炎症小体激活和病原体清除。随着研究深入，GBP2的功能图景已从感染免疫大幅拓展至肿瘤生物学、代谢疾病和神经炎症等领域，呈现显著的“环境依赖性双重角色”：在部分肿瘤中作为抑癌因子（如皮肤黑色素瘤、结直肠癌），在另一些肿瘤中则促进进展（如胶质母细胞瘤、透明细胞肾细胞癌）。GBP2还参与脂肪细胞分化调控、糖尿病肾病中M1巨噬细胞极化、以及小胶质细胞介导的神经炎症。
GBP2具有动力蛋白超家族典型的模块化结构：
大GTP酶结构域（LG domain） ：位于N端，包含G1-G4核苷酸结合基序。GBP的LG结构域具有独特的“鸟嘌呤帽”和“磷酸帽”结构，与经典GTP酶不同，其G4基序为RD（精氨酸-天冬氨酸）而非(N/T)KxD，导致GBP对鸟嘌呤核苷酸的结合特异性存在差异。
中间结构域（MD domain） ：由α7-α11螺旋组成，参与二聚体界面的形成。
GTP酶效应结构域（GED） ：位于C端，在单体闭合构象中与LG结构域通过盐桥网络相互作用。GTP水解诱导构象开放，释放C端异戊二烯基团。
C端CaaX异戊二烯化基序：GBP2携带CaaX基序，介导香叶基香叶基化修饰，使其能够靶向高尔基体、质膜和核周膜等膜结构。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
暂无相关论文。