GC-Plenti-SFFV-ATP5IF1-Flag-P2A-Puro
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产品说明书
Product Manual
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-plenti-SFFV-HSP90AA1（Human)-Flag-P2A-puro | ||
| 基因名称 | HSP90AA1 | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | heat shock protein 90 alpha family class A member 1 | 基因转录本 | NM_016311.5 |
| 基因别称 | IP; ATPI; ATPIP; ATPIF1 | 表达蛋白 | NP_057395.1 |
| 基因ID | 93974 | 转录本长度 | 318bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
人ATP5IF1基因定位于第1号染色体短臂的1p35.3区域，是编码线粒体ATP合酶抑制因子1（IF1）的核基因，线粒体氧化磷酸化系统的关键调控蛋白，作为ATP合酶的内源性抑制剂，在细胞能量代谢重编程、应激响应及多种病理过程中发挥核心作用。人ATP5IF1由106个氨基酸组成，分子量约12,249 Da。该蛋白具有以下结构特征：
N端抑制结构域：包含残基26-52的抑制性N端区域，负责与ATP合酶F1催化结构域的结合。C端二聚化结构域：包含残基74-106，形成反平行α-螺旋卷曲螺旋，介导二聚体的形成；组氨酸富集区：包含H48、H49、H55、H56等多个组氨酸残基，参与pH感受和寡聚化调控。
该蛋白属于ATPase抑制剂家族（ATPase inhibitor family），在进化上高度保守——192种生物拥有与人ATP5IF1的直系同源基因，包括黑猩猩、恒河猴、狗、牛、小鼠、大鼠、斑马鱼和蛙。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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