GC-Plenti-SFFV-TCF12(Human)-Flag-P2A-Puro
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过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-Plenti-SFFV-TCF12(Human)-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | TCF12 | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | transcription factor 12 | 基因转录本 | NM_207037.2 |
| 基因别称 | HEB; p64; CRS3; HH26; HTF4; TCF-12; bHLHb20; HsT17266 | 表达蛋白 | NP_996920.1 |
| 基因ID | 6938 | 转录本长度 | 2118bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
人TCF12基因定位于第15号染色体长臂的15q21.3区域（15q21），位于正链上，包含21个外显子，TCF12属于碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）转录因子家族中的A类（E蛋白） 。bHLH蛋白通过其碱性区域结合DNA，通过螺旋-环-螺旋结构域介导二聚化。E蛋白（包括TCF12/HEB、TCF3/E2A和TCF4/E2-2）是bHLH家族中的广泛表达成员，在多种细胞谱系中作为转录调控的核心组分。
TCF12蛋白由682个氨基酸组成，分子量约73 kDa，具有以下结构特征：
N端：富含丝氨酸，包含一个潜在的亮氨酸拉链结构域。
C端：包含bHLH结构域以及一个A类特异性结构域。
功能结构域：除bHLH结构域外，TCF12还包含两个激活结构域（AD1/AD2）和一个抑制结构域（Rep domain）。
核定位：TCF12定位于细胞核，在核染色质和转录因子复合物中发挥作用。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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