GC-plenti-SFFV-HSP90AA1（Human)-Flag-P2A-puro
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过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-plenti-SFFV-HSP90AA1（Human)-Flag-P2A-puro | ||
| 基因名称 | HSP90AA1 | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | heat shock protein 90 alpha family class A member 1 | 基因转录本 | NM_001017963.3 |
| 基因别称 | EL52; HSPN; LAP2; HSP86; HSPC1; HSPCA; Hsp89; Hsp90; | 表达蛋白 | NP_001017963.2 |
| 基因ID | 3320 | 转录本长度 | 2562bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
HSP90AA1（Heat Shock Protein 90 Alpha Family Class A Member 1）是编码热休克蛋白90α（Hsp90α）的基因，基因定位于第14号染色体长臂的14q32.33区域，位于互补链上，属于热休克蛋白家族中最重要、研究最为深入的成员之一。作为分子伴侣，细胞蛋白质稳态网络的核心枢纽，通过与数百种蛋白的相互作用，参与信号转导、应激响应、自噬调控、发育和生殖等多种关键生物学过程。作为应激诱导型分子伴侣，Hsp90α的表达受到HSF1等转录因子的精密调控，其活性则通过ATP依赖的构象循环和多种翻译后修饰进行调节。
HSP90AA1基因具有较为复杂的转录调控结构。该基因编码两种不同的mRNA转录本，分别由独立的转录起始位点（TSS）启动。转录变体1（TV1） ：登录号NM_001017963.2，mRNA全长3,887 bp，包含12个外显子，基因组跨度59,012 bp。该转录本编码854个氨基酸的异构体1（isoform 1，NP_001017963），这是灵长类特有的Hsp90α亚型；转录变体2（TV2） ：登录号NM_005348.3，mRNA全长3,366 bp，包含11个外显子，基因组跨度仅6,438 bp。该转录本编码732个氨基酸的异构体2（isoform 2，NP_005339），这是研究最为深入、被广泛认知的Hsp90α形式；
Hsp90α蛋白包含三个高度保守的结构域，这些结构域在其分子伴侣功能中各自承担着独特角色：
N端ATP结合结构域：位于蛋白的氨基端，具有ATP结合和水解活性。该结构域是Hsp90抑制剂（如格尔德霉素及其衍生物）的结合位点。在静息状态下，Hsp90通过C端结构域的二聚化形成同源二聚体，呈“开放”构象；当ATP结合后，N端结构域发生显著的构象变化，相互接触形成“闭合”的活性构象。
中间结构域：参与客户蛋白的结合以及ATP水解的催化过程。该结构域与N端结构域协同工作，完成ATP依赖的分子伴侣循环。
C端二聚化结构域：介导Hsp90二聚体的形成，是维持其功能活性所必需的。该结构域还包含一个保守的MEEVD序列，用于与含有TPR结构域的共伴侣蛋白相互作用。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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