GC-Plenti-SFFV-FBOX9(Human)-Flag-P2A-Puro
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产品说明书
Product Manual
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-Plenti-SFFV-FBOX9(Human)-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | FBOX9 | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | F-box protein 9 | 基因转录本 | NM_033480.3 |
| 基因别称 | FBX9; VCIA1; NY-REN-57; dJ341E18.2 | 表达蛋白 | NP_001346567.1 |
| 基因ID | 26268 | 转录本长度 | 3099bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
FBXO9基因位于人类第6号染色体短臂12.1区段（6p12.1），包含14个外显子，是SCF（SKP1-CUL1-F-box）E3泛素连接酶复合体的底物识别亚基，通过泛素化修饰调控多种靶蛋白的稳定性。自1999年被鉴定以来，FBXO9的功能研究揭示了其在不同生理和病理背景下的双重角色：它既是胚胎干细胞多能性维持和神经元-胶质命运决定的关键调控因子，又在多种恶性肿瘤中表现出背景依赖的促癌或抑癌活性，FBXO9在急性髓系白血病（AML）中作为肿瘤抑制因子发挥作用，其缺失显著加速白血病发生；而在肝细胞癌和多发性骨髓瘤中，FBXO9的过表达则促进肿瘤进展。这种功能异质性使FBXO9成为研究泛素化调控网络复杂性的理想模型。
FBXO9蛋白质具有两个主要结构域，位于N端的F-box结构域（约40个氨基酸），负责与SKP1结合和位于C端的四肽重复（TPR）基序，介导与CUL1的相互作用。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
| 1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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