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GC-Plenti-SFFV-ACE2（human)-Flag-P2A-puro
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-Plenti-SFFV-ACE2（human)-Flag-P2A-puro | ||
| 基因名称 | ACE2 | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | angiotensin converting enzyme 2 | 基因转录本 | NM_001371415.1 |
| 基因别称 | ACEH | 表达蛋白 | NP_001358344.1 |
| 基因ID | 59272 | 转录本长度 | 2415bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
血管紧张素转换酶2（Angiotensin-Converting Enzyme 2，ACE2）基因位于人类X染色体短臂（Xp22），包含18个外显子,是一种I型整合膜蛋白,N端信号肽由17个氨基酸组成，引导蛋白质向内质网转运，中间147-555aa之间，包含保守的HEXXH锌结合基序；跨膜区与胞质尾包含一个22氨基酸的疏水跨膜序列和43氨基酸的胞质结构域，含有潜在的磷酸化位点。ACE2在肾素-血管紧张素系统（RAS）中扮演负性调控角色，通过将血管紧张素II转化为血管紧张素1-7，产生拮抗血管紧张素II的血管舒张、抗纤维化和抗炎效应。除酶催化功能外，ACE2还通过其collectrin样结构域调控肠道中性氨基酸转运，维持膳食氨基酸稳态。2003年，ACE2被鉴定为SARS冠状病毒的功能性受体，2020年进一步确认为SARS-CoV-2的入胞受体，使其成为COVID-19大流行中最受关注的人类分子之一。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
| 1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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