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pcDNA3.1-CMV-POSTN(human)-3×FLAG-NEO
产品基本信息
| 产品名称 | pcDNA3.1-CMV-POSTN(human)-3×FLAG-NEO | ||
| 基因名称 | POSTN | 物种 | 人（Human） |
| 基因全称 | periostin | 基因转录本 | NM_006475.3 |
| 基因别称 | PN; OSF2; OSF-2; PDLPOSTN | 表达蛋白 | NP_006466.2 |
| 基因ID | 10631 | 转录本长度 | 2508bp |
| 拷贝数 | 高 | 筛选抗性 | NEO/G418 |
| 培养温度 | 37°C | 标签 | 3xFlag |
| 原核抗性 | Amp+ | 荧光标记 | 无 |
基因基本信息
POSTN（Periostin，骨膜蛋白）位于染色体13q13.3，编码的mRNA存在多种剪接变体，基因编码一种分泌型细胞外基质蛋白，最初因在骨膜和牙周韧带中高表达而被鉴定为成骨细胞特异性因子-2（OSF-2）。POSTN属于弹性微纤维界面蛋白（EMILIN）家族，其蛋白结构由N端富含半胱氨酸的EMI结构域、四个串联的FAS1结构域和C端亲水结构域组成，能够与胶原I、纤连蛋白、整合素及BMP1等多种细胞外基质蛋白和细胞表面受体相互作用。POSTN在正常组织中低水平表达，但在组织损伤、炎症、纤维化和肿瘤等病理条件下显著上调。
POSTN蛋白分子量约为90 kDa，由三个功能明确的结构域组成：
N端EMI结构域： 位于N端的EMI结构域约由80个氨基酸残基组成，包含6个高度保守的半胱氨酸残基。该结构域能够与胶原I、纤连蛋白和Notch-1结合，并且在POSTN的多聚化中发挥关键作用。EMI结构域通过与纤连蛋白和腱生蛋白C形成网络结构，促进胶原的交联，从而增强ECM的收缩和浸润。
四个串联的FAS1结构域： POSTN的中央区域由四个串联的FAS1（Fasciclin-like）结构域组成。FAS1结构域最初在昆虫神经细胞黏附分子中被发现，在POSTN中作为核心功能区域，能够与腱生蛋白C、骨形态发生蛋白1（BMP-1）和CCN3结合。更为重要的是，FAS1结构域通过结合靶细胞表面的整合素受体（包括αvβ3、αvβ5和α6β4），激活细胞内多种信号通路，这是POSTN发挥生物学功能的主要途径。
C端结构域（CTD）： C端结构域富含精氨酸，包含一个肝素结合位点，负责与蛋白聚糖结合。这一结合可能调控细胞迁移和生长因子信号传导等过程。C端区域同时也是蛋白水解切割和剪接变体形成的位点，不同C端异构体可能具有不同的功能特性。
1.载体构建出库标准是什么？
载体出库默认小提质粒出库，质粒量≥4ug，含甘油菌和穿刺菌。如需要无内毒素质粒提取质粒，我司可提供无内毒素质粒提取业务。
无内毒素质粒中提（A) | 质粒量≥35ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提(B) | 无内毒素中提出库是质粒量≥100ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提 | 无内毒素大提出库是质粒量≥500ug，浓度大于≥500ng/uL |
2.甘油菌保存方法？
甘油菌50%（v/v）=新鲜菌种：灭菌甘油制备而成，收到甘油菌可直接放-80保存1年
3.甘油菌的复苏方法？
从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
4.穿刺菌的保存方法？
穿刺菌为无菌枪头取新鲜菌液，然后接种形成穿刺菌，穿刺接种的细菌在温箱中孵育过夜，并在第二天上午检查其是否生长，确保制备的穿刺菌表面上能看到细菌后冰袋邮寄发货。穿刺菌4°C保存时间不超过30d，收到穿刺菌后须在2周内，在含有相应抗生素（抗性信息可在质粒图谱中查看）琼脂平板上划线培养出单菌落，挑取单个克隆进行后续操作。
5.无内毒素质粒提取菌液制备建议方法？
制备起始培养物制备：从甘油菌或者穿刺菌制备的单克隆菌落平板中，挑取新鲜的单克隆菌落，接种于2–5 mL含有相应选择性抗生素的LB培养基中，在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养约8小时（使用的试管或锥形瓶体积应至少为培养物体积的4倍）。
将起始培养物按1/500至1/1000的比例稀释到选择性LB培养基中。在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养12–16小时（使用的锥形瓶或容器体积应至少为培养物体积的4倍）后用商品化的无内毒素质粒试剂盒提取，提取的无内毒素质粒用于后续细胞转染或病毒包装等。
注意：无内毒素提取的质粒建议通过酶切鉴定和测序鉴定与原质粒无差异后进行后续实验。避免质粒提取或菌液接种过程所引起的菌液交叉污染。
9.测序结果原始文件用什么打开？
测序结果原始文件可以用 Snapgene 软件，DNAman分析软件等进行分析。
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