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pcDNA3.1-CMV-Bcl3(mouse)-3×HA-SV40-Neo
产品基本信息
| 产品名称 | pcDNA3.1-CMV-Bcl3(mouse)-3×HA-SV40-Neo | ||
| 基因名称 | Bcl3 | 物种 | 小鼠（Mouse） |
| 基因全称 | B cell leukemia/lymphoma 3 | 基因转录本 | NM_033601.3 |
| 基因别称 | Bcl-3 | 表达蛋白 | NP_291079.2 |
| 基因ID | 12051 | 转录本长度 | 1344bp |
| 拷贝数 | 高 | 筛选抗性 | NEO/G418 |
| 培养温度 | 37°C | 标签 | 3xHA |
| 原核抗性 | Amp+ | 荧光标记 | 无 |
基因基本信息
Bcl3（B-cell lymphoma 3）基因位于第7号染色体，编码一种非典型IκB家族蛋白，在NF-κB信号通路中扮演独特的双重调控角色。与经典IκB蛋白不同，Bcl3主要定位于细胞核，核心结构特征是包含7个串联的锚蛋白重复序列（Ankyrin repeats），重复序列构成了蛋白-蛋白相互作用的结构基础，介导Bcl3与NF-κB p50（NFKB1）和p52（NFKB2）同源二聚体的特异性结合通过与p50和p52同源二聚体结合，发挥转录共激活或共抑制功能。
Bcl3的中央区域由 7个串联的锚蛋白重复序列构成，。这个ARD域是Bcl3实现其功能的基础，主要负责介导蛋白质与蛋白质之间的相互作用，特别是与NF-κB家族成员结合，第一个和第二个锚蛋白重复序列附近的一个短小结构域内，为淋巴细胞存活结构域。Bcl3的N端和C端都包含转录激活域。当Bcl3与DNA上的p50或p52同源二聚体结合后，这两个末端区域能够招募共激活因子（如CBP/p300），从而将原本抑制转录的复合物转变为激活状态。Bcl3的N端包含一个经典的核定位信号。这使得Bcl3即使不结合NF-κB，也能被转运入核。
1.载体构建出库标准是什么？
载体出库默认小提质粒出库，质粒量≥4ug，含甘油菌和穿刺菌。如需要无内毒素质粒提取质粒，我司可提供无内毒素质粒提取业务。
无内毒素质粒中提（A) | 质粒量≥35ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提(B) | 无内毒素中提出库是质粒量≥100ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提 | 无内毒素大提出库是质粒量≥500ug，浓度大于≥500ng/uL |
2.甘油菌保存方法？
甘油菌50%（v/v）=新鲜菌种：灭菌甘油制备而成，收到甘油菌可直接放-80保存1年
3.甘油菌的复苏方法？
从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
4.穿刺菌的保存方法？
穿刺菌为无菌枪头取新鲜菌液，然后接种形成穿刺菌，穿刺接种的细菌在温箱中孵育过夜，并在第二天上午检查其是否生长，确保制备的穿刺菌表面上能看到细菌后冰袋邮寄发货。穿刺菌4°C保存时间不超过30d，收到穿刺菌后须在2周内，在含有相应抗生素（抗性信息可在质粒图谱中查看）琼脂平板上划线培养出单菌落，挑取单个克隆进行后续操作。
5.无内毒素质粒提取菌液制备建议方法？
制备起始培养物制备：从甘油菌或者穿刺菌制备的单克隆菌落平板中，挑取新鲜的单克隆菌落，接种于2–5 mL含有相应选择性抗生素的LB培养基中，在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养约8小时（使用的试管或锥形瓶体积应至少为培养物体积的4倍）。
将起始培养物按1/500至1/1000的比例稀释到选择性LB培养基中。在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养12–16小时（使用的锥形瓶或容器体积应至少为培养物体积的4倍）后用商品化的无内毒素质粒试剂盒提取，提取的无内毒素质粒用于后续细胞转染或病毒包装等。
注意：无内毒素提取的质粒建议通过酶切鉴定和测序鉴定与原质粒无差异后进行后续实验。避免质粒提取或菌液接种过程所引起的菌液交叉污染。
9.测序结果原始文件用什么打开？
测序结果原始文件可以用 Snapgene 软件，DNAman分析软件等进行分析。
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