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pcDNA3.1-CMV-3×Flag-TRPV2（Mouse)-SV40-NEO
产品基本信息
| 产品名称 | pcDNA3.1-CMV-3×Flag-TRPV2（Mouse)-SV40-NEO | ||
| 基因名称 | TRPV2 | 物种 | 小鼠（Mouse） |
| 基因全称 | transient receptor potential cation channel, subfamily V, member 2 | 基因转录本 | NM_011706.2 |
| 基因别称 | GRC, OTRPC2, VRL-1, Vrl1 | 表达蛋白 | NP_035836.2 |
| 基因ID | 22368 | 转录本长度 | 2292bp |
| 拷贝数 | 高 | 筛选抗性 | 无 |
| 培养温度 | 37°C | 标签 | 3xFlag |
| 原核抗性 | Amp+ | 荧光标记 | 无 |
基因基本信息
小鼠Trpv2基因定位于11号染色体B2带（小鼠11号染色体B2带在细胞遗传学上与人17号染色体p11.2区域具有同线性（synteny）关系，反映了TRPV2基因在哺乳动物进化中的稳定性），包含18个外显子，是瞬时受体电位香草酸亚家族中一个独特的多觉感受器通道，可被极端高温（>52°C）、机械牵张和多种化学刺激激活。小鼠Trpv2基因作为该通道研究的重要模式系统，其基因组定位、外显子结构、蛋白质特征及功能表型已得到较为系统的阐明。
小鼠TRPV2的拓扑结构遵循TRP通道家族的典型模式，从N端到C端依次包含以下功能模块：
胞内N端区域（约1-390位）包含6个锚蛋白重复序列（ANK repeats），形成锚蛋白重复域（ARD）。Pfam数据库将其归类为PF12796（Ankyrin repeats, 3 copies）。ARD的凹面由β-发夹结构组成，在TRPV2中朝向外侧并暴露于细胞质。小鼠TRPV2的ARD表面电荷分布与人TRPV2可能存在细微差异，这可能影响配体结合和通道转运调控。
六个跨膜螺旋（S1-S6）构成通道的传导单元。S1-S4形成电压感受样结构域（VSLD），S5和S6以及它们之间的孔道环构成孔道区域，S4-S5连接体将电压感受域与孔道域连接。
C端胞质区域（约639-761位，以人TRPV2坐标推算）：包含TRP结构域、PIP₂结合位点和钙调蛋白结合域。TRP结构域包含保守的TRP盒序列，参与通道寡聚化和门控信号传导。
1.载体构建出库标准是什么？
载体出库默认小提质粒出库，质粒量≥4ug，含甘油菌和穿刺菌。如需要无内毒素质粒提取质粒，我司可提供无内毒素质粒提取业务。
无内毒素质粒中提（A) | 质粒量≥35ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提(B) | 无内毒素中提出库是质粒量≥100ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提 | 无内毒素大提出库是质粒量≥500ug，浓度大于≥500ng/uL |
2.甘油菌保存方法？
甘油菌50%（v/v）=新鲜菌种：灭菌甘油制备而成，收到甘油菌可直接放-80保存1年
3.甘油菌的复苏方法？
从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
4.穿刺菌的保存方法？
穿刺菌为无菌枪头取新鲜菌液，然后接种形成穿刺菌，穿刺接种的细菌在温箱中孵育过夜，并在第二天上午检查其是否生长，确保制备的穿刺菌表面上能看到细菌后冰袋邮寄发货。穿刺菌4°C保存时间不超过30d，收到穿刺菌后须在2周内，在含有相应抗生素（抗性信息可在质粒图谱中查看）琼脂平板上划线培养出单菌落，挑取单个克隆进行后续操作。
5.无内毒素质粒提取菌液制备建议方法？
制备起始培养物制备：从甘油菌或者穿刺菌制备的单克隆菌落平板中，挑取新鲜的单克隆菌落，接种于2–5 mL含有相应选择性抗生素的LB培养基中，在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养约8小时（使用的试管或锥形瓶体积应至少为培养物体积的4倍）。
将起始培养物按1/500至1/1000的比例稀释到选择性LB培养基中。在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养12–16小时（使用的锥形瓶或容器体积应至少为培养物体积的4倍）后用商品化的无内毒素质粒试剂盒提取，提取的无内毒素质粒用于后续细胞转染或病毒包装等。
注意：无内毒素提取的质粒建议通过酶切鉴定和测序鉴定与原质粒无差异后进行后续实验。避免质粒提取或菌液接种过程所引起的菌液交叉污染。
9.测序结果原始文件用什么打开？
测序结果原始文件可以用 Snapgene 软件，DNAman分析软件等进行分析。
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