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pCMV-SP6-Flag-HSPB1(human)-SV40-pA
产品基本信息
| 产品名称 | pCMV-SP6-Flag-HSPB1(human)-SV40-pA | ||
| 基因名称 | HSPB1 | 物种 | 人（human） |
| 基因全称 | heat shock protein family B (small) member 1 | 基因转录本 | NM_001540.5 |
| 基因别称 | CMT2F, HMN2B, HMND3, HSP27, HSP28, Hsp25 | 表达蛋白 | NP_001531.1 |
| 基因ID | 3315 | 转录本长度 | 615bp |
| 拷贝数 | 高 | 筛选抗性 | 无 |
| 培养温度 | 37°C | 标签 | Flag |
| 原核抗性 | Amp+ | 荧光标记 | 无 |
基因基本信息
人HSPB1基因，亦称HSP27，是人类小热休克蛋白（sHSP）家族中研究最为深入的成员之一，定位于染色体7q11.23，包含3个外显子。编码一种TP非依赖性分子伴侣，在细胞应激防御、蛋白质稳态维持、细胞骨架动力学调控及凋亡抑制中发挥核心作用。HSPB1在骨骼肌、心肌和平滑肌中表达最为丰富，其表达受热休克转录因子HSF1的经典调控，并通过多层级磷酸化修饰（Ser15、Ser78、Ser82）实现功能状态的动态切换。HSPB1的寡聚化状态即从大型多聚体到二聚体/单体的转换是其功能调控的核心机制，直接决定其伴侣活性与细胞保护能力。在病理层面，HSPB1的功能获得性突变是轴索型腓骨肌萎缩症（CMT2F）和远端遗传性运动神经病（dHMN）的明确致病原因，突变蛋白通过异常聚集和神经丝转运障碍导致运动神经元变性。
蛋白结构：N端区域（约1-90位），包含保守的WDPF基序（Trp-Asp-Pro-Phe），WDPF基序基序在HSPB1寡聚化中发挥关键作用。N端区域还含有Ser15、Ser78和Ser82三个主要的磷酸化位点，这些位点的磷酸化状态直接调控HSPB1的寡聚化行为。
α-晶体蛋白结构域（约90-180位），这是小热休克蛋白家族的定义性特征，由6至8个β-链组织成两个β-折叠片层，两侧为可变长度的N端和C端延伸。该结构域是HSPB1行使分子伴侣功能的核心区域，也是绝大多数致病突变的发生部位。HSPB1的ACD中含有唯一的半胱氨酸残基Cys137，位于β7链中，该残基在氧化条件下可形成分子间二硫键，导致HSPB1二聚体的交联。
C端区域（约180-205位）：较短且具有高度柔性，参与寡聚体的稳定化。该区域包含一个保守的I/V-X-I/V基序，被认为与底物结合有关。
1.载体构建出库标准是什么？
载体出库默认小提质粒出库，质粒量≥4ug，含甘油菌和穿刺菌。如需要无内毒素质粒提取质粒，我司可提供无内毒素质粒提取业务。
无内毒素质粒中提（A) | 质粒量≥35ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提(B) | 无内毒素中提出库是质粒量≥100ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提 | 无内毒素大提出库是质粒量≥500ug，浓度大于≥500ng/uL |
2.甘油菌保存方法？
甘油菌50%（v/v）=新鲜菌种：灭菌甘油制备而成，收到甘油菌可直接放-80保存1年
3.甘油菌的复苏方法？
从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
4.穿刺菌的保存方法？
穿刺菌为无菌枪头取新鲜菌液，然后接种形成穿刺菌，穿刺接种的细菌在温箱中孵育过夜，并在第二天上午检查其是否生长，确保制备的穿刺菌表面上能看到细菌后冰袋邮寄发货。穿刺菌4°C保存时间不超过30d，收到穿刺菌后须在2周内，在含有相应抗生素（抗性信息可在质粒图谱中查看）琼脂平板上划线培养出单菌落，挑取单个克隆进行后续操作。
5.无内毒素质粒提取菌液制备建议方法？
制备起始培养物制备：从甘油菌或者穿刺菌制备的单克隆菌落平板中，挑取新鲜的单克隆菌落，接种于2–5 mL含有相应选择性抗生素的LB培养基中，在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养约8小时（使用的试管或锥形瓶体积应至少为培养物体积的4倍）。
将起始培养物按1/500至1/1000的比例稀释到选择性LB培养基中。在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养12–16小时（使用的锥形瓶或容器体积应至少为培养物体积的4倍）后用商品化的无内毒素质粒试剂盒提取，提取的无内毒素质粒用于后续细胞转染或病毒包装等。
注意：无内毒素提取的质粒建议通过酶切鉴定和测序鉴定与原质粒无差异后进行后续实验。避免质粒提取或菌液接种过程所引起的菌液交叉污染。
9.测序结果原始文件用什么打开？
测序结果原始文件可以用 Snapgene 软件，DNAman分析软件等进行分析。
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