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pYES2/CT
产品基本信息
| 产品名称 | pYES2/CT | ||
| 质粒全程 | pYES2-CT-GAL1-MCS-V5-6xHis-URA3 | ||
| 种类 | 普通表达载体 | 启动子 | GAL1 |
| 拷贝数 | 高 | 筛选抗性 | 无 |
| 培养温度 | 37°C | 原核抗性 | Amp+ |
| 培养菌株 | DH5 alpha | 筛选抗性 | URA3 |
骨架载体应用用途
pYES2/CT 是一种用于在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中诱导表达重组蛋白的穿梭质粒。它的核心特点是利用 GAL1 启动子实现半乳糖诱导的高水平表达，并在目的蛋白的 C 端融合了 V5 抗原决定簇和 6xHis 标签，方便后续的检测与纯化。
诱导型启动子（GAL1）：受培养基中碳源的严格调控。葡萄糖抑制其转录，半乳糖则强烈诱导表达。这种“开关”机制允许先让酵母长到合适密度，再切换碳源启动蛋白生产。
C 端双标签（V5 与 6xHis）：这是 pYES2/CT 区别于 pYES2/NT（N 端标签）的关键。V5 标签用于 Western Blot 等免疫学检测；6xHis 标签则用于通过镍离子螯合层析进行亲和纯化。因为标签在 C 端，它特别适合表达那些 N 端结构对功能至关重要、不宜被修饰的蛋白。
筛选标记：在大肠杆菌中，使用氨苄青霉素（Ampicillin）抗性筛选；在酵母中，利用 URA3 基因通过尿嘧啶缺陷型培养基（SC-U）进行营养缺陷型筛选。
1.载体构建出库标准是什么？
载体出库默认小提质粒出库，质粒量≥4ug，含甘油菌和穿刺菌。如需要无内毒素质粒提取质粒，我司可提供无内毒素质粒提取业务。
无内毒素质粒中提（A) | 质粒量≥35ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提(B) | 无内毒素中提出库是质粒量≥100ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提 | 无内毒素大提出库是质粒量≥500ug，浓度大于≥500ng/uL |
2.甘油菌保存方法？
甘油菌50%（v/v）=新鲜菌种：灭菌甘油制备而成，收到甘油菌可直接放-80保存1年
3.甘油菌的复苏方法？
从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
4.穿刺菌的保存方法？
穿刺菌为无菌枪头取新鲜菌液，然后接种形成穿刺菌，穿刺接种的细菌在温箱中孵育过夜，并在第二天上午检查其是否生长，确保制备的穿刺菌表面上能看到细菌后冰袋邮寄发货。穿刺菌4°C保存时间不超过30d，收到穿刺菌后须在2周内，在含有相应抗生素（抗性信息可在质粒图谱中查看）琼脂平板上划线培养出单菌落，挑取单个克隆进行后续操作。
5.无内毒素质粒提取菌液制备建议方法？
制备起始培养物制备：从甘油菌或者穿刺菌制备的单克隆菌落平板中，挑取新鲜的单克隆菌落，接种于2–5 mL含有相应选择性抗生素的LB培养基中，在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养约8小时（使用的试管或锥形瓶体积应至少为培养物体积的4倍）。
将起始培养物按1/500至1/1000的比例稀释到选择性LB培养基中。在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养12–16小时（使用的锥形瓶或容器体积应至少为培养物体积的4倍）后用商品化的无内毒素质粒试剂盒提取，提取的无内毒素质粒用于后续细胞转染或病毒包装等。
注意：无内毒素提取的质粒建议通过酶切鉴定和测序鉴定与原质粒无差异后进行后续实验。避免质粒提取或菌液接种过程所引起的菌液交叉污染。
9.测序结果原始文件用什么打开？
测序结果原始文件可以用 Snapgene 软件，DNAman分析软件等进行分析。
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