pCMV-PE2

产品基本信息

骨架载体应用用途

pCMV-PE2是David Liu实验室于2019年开发的第二代先导编辑（prime editing）表达质粒，以CMV启动子驱动PE2融合蛋白（SpCas9 H840A切口酶与工程化MMLV逆转录酶的融合体）的表达，配合pegRNA即可实现无需双链断裂和供体DNA的精准基因组修饰。

PE2针对PE1野生型逆转录酶的热稳定性、持续合成能力和DNA-RNA亲和力不足进行了关键改进，通过定向筛选，引入了五个氨基酸突变（具体为D200N、L603W、T330P、T306K、W313F），显著提升了逆转录酶的热稳定性、持续合成能力和对DNA-RNA杂合体的亲和力。这些改造使PE2的编辑效率较PE1提升了最高5.1倍。

PE3/PE3b是在PE2基础通过额外引入一条nicking sgRNA在非编辑链上制造第二个切口，引导细胞修复机制偏向编辑链，将编辑效率进一步提升2-4倍。PE3b则对nicking sgRNA进行了序列设计优化，使其仅在新编辑序列形成后才有效切割，从而减少副产物。pCMV-PE2均可与pegRNA组合进行PE2/PE3/PE3b/twin-PE等使用。